PRACTICAS DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA: CROMATOGRAFIA EN PAPEL DE AZUCARES

ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE INGENIERÍA QUÍMICA

INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

INTEGRANTES:

Barragan Fernando

Valle Jhonatan

DOCENTE:

Dr Galo Insuasti

FECHA:

2014/06/25

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL ASCENDENTE DE AZÚCARES

OBJETIVOS:

GENERAL:

Verificar la separación de compuestos de los azúcares presentes

ESPECÍFICOS:

Evidenciar la participación de los 3 factores presentes en la cromatografía (Fase Móvil, Fase Estacionaria, Azúcares).

Interpretar correctamente la cromatografía una vez realizada la identificación de los azúcares presentes y/o utilizados.

Destacar la utilización de este método para identificar azucares.

MARCO TEÓRICO:

Cromatografía definición:

Los métodos cromatográficos son un conjunto de técnicas empleadas para separar compuestos químicos de una mezcla. Su nombre significa “escribir con color” ya que la cromatografía fue empleada por primera para separar pigmentos. Existen numerosas variantes del método, pero el fundamento es común a todos los métodos:

Clasificación del método cromatográfico

Los métodos cromatográficos pueden ser clasificados según:

El estado físico de la fase
El mecanismo de separación
El tipo de soporte.
La dirección de la corrida

Según el estado de las fases:

Fase móvil: Que puede ser un gas o un líquido.

Fase estacionaria: Que puede ser un líquido o un sólido.

Se pueden establecer cuatro tipos de cromatografía: gas-líquido, líquido-líquido, gas-sólido, líquido-sólido.

Fase móvil = Solvente

Fase estacionaria = Papel cromatografico

Mecanismos que internen en la separación cromatográfica

Adsorción: Gases o líquidos contenidos en la fase móvil son retenidos por una adsorción selectiva en la superficie del sólido que constituye la fase estacionaria.. Este mecanismo controla la cromatografía gas-sólido y líquido-sólido. La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrógeno, efectos inductivos, etc).

Reparto: Los componentes de la fase móvil son retenidos por la fase estacionaria líquida en función de su solubilidad en ella. Si las dos son líquidas se tiene un proceso de extracción en continuo.

Intercambio Iónico: La fase estacionaria constituida por un sólido intercambiando iones con iones contenidos en la fase móvil, líquida. El intercambio de iones sólido-solución esta regulado por la afinidad química de los iones con ambas fases y por sus respectivas concentraciones.

Tamaño Molecular: Especies neutras de alto peso molecular pueden ser separadas en virtud de su tamaño donde la fase estacionaria es un gel hidrofílico altamente poroso que retiene las moléculas de menor tamaño al de los poros. Las moléculas de mayor tamaño son retardadas en su paso por pequeñas fuerzas de adsorción de la superficie externa del gel que luego son excluidas de la fase estacionaria.

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL ASCENDENTE DE LOS AZÚCARES

Es una técnica de separación e identificación de sustancias químicas mediante un disolvente que se mueve sobre hojas o tiras de papel de filtro u papeles especialmente diseñados. La cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o polifuncionales. El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos naturales La fase móvil se desplaza a través del papel, arrastrando los componentes de la mezcla a distintas velocidades En esta cromatografía se utiliza el fenómeno de reparto en donde la fase estacionaria se halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad forma parte de la fase estacionaria que es un complejo celulosa-agua.

Requisitos:

Contar con los estándares de las sustancias que quiero estudiar es decir de las sustancias puras (glucosa, fructosa, sacarosa, maltosa)
Contar con una hoja de papel cromatográfico WHATMAN Nº 1
Disponer de una cuba cromatográfica que contiene el sistema del solvente

PROCEDIMIENTO:

A continuacion mostramos como se realizo este laboratorio

RESULTADO PRÁCTICO:

En las presentes imagenes se puede apreciar la aparicion de los azucares , los cuales son identificados correctamente

se muestra la interacción entre las tres fases:

fase móvil = solvente ; fase estacionaria = papel cromatográfico ;

estructura del compuesto = azucares

DISCUSIÓN:

La cromatografía consiste en que sobre papel se seca un poco del extracto de la muestra problema. Para evitar evaporación se cuelga el papel dentro de una cuba cromatográfíca en forma tal que la mancha pueda ser irrigada con la fase móvil .cuando la fase móvil ha saturado el papel hasta cierta distancia, se saca el papel de la cámara y se procede al revelado. .El revelado cromatográfico puede realizarse mediante diversos reveladores, luego de esto podemos analizar el azúcar y podemos decir que nuestra muestra problema puede tener glucosa , fructosa, maltosa y sacarosa en su composición aunque puede ser también una mezcla de dos de ellas nuestra muestra problema dos dio un revelado que se aproxima a ser una fructosa y en algo a la glucosa , puesto que no se reveló de manera correcta podemos ver una mancha borrosa al mismo nivel que la fructosa y de igual manera a la glucosa, cada uno de estos estándares así como la nuestra problema subieron 5 cm aproximadamente.

El papel utilizado es de una buena separación de azúcares de los cuales dos no han sido identificados y se debe correr con otros estándares u otros solventes

CONCLUSIÓN:

Concluimos que para realizar la cromatografía de las muestras se debe utilizar sustancia pura (Estándares), para identificar la muestra problema mediante la lectura del revelado lo cual se hace de acuerdo a la altura que subió cada uno de los estándares colocados en el papel cromatografico.

También pudimos concluir que nuestra muestra problema tiene glucosa y fructosa ya que los tres se encuentran en el mismo nivel pero sin embargo la sacarosa también puede estar presente aunque tuvimos problemas en el revelado y la macha es borrosa , otra posibilidad es que haya una mezcla de los estándares,

O el solvente utilizado no fue el indicado para identificar a la sacarosa.

La cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o polifuncionales; El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos naturales en donde la fase móvil se desplaza a través del papel, arrastrando los componentes de la mezcla a distintas velocidades.